先天性淋巴細(xì)胞（ILCs）是固有免疫細(xì)胞的亞群，參與調(diào)控組織炎癥及免疫過(guò)程。已發(fā)現(xiàn)存在于外周血、實(shí)質(zhì)器官和粘膜組織中，主要是組織駐留細(xì)胞。作為天然免疫細(xì)胞，ILC不表達(dá)類(lèi)似于T細(xì)胞和B細(xì)胞表面的抗原受體，無(wú)需經(jīng)過(guò)抗原提呈即可激活并擴(kuò)增。ILC在細(xì)胞因子刺激下進(jìn)行分化，擴(kuò)增并分泌細(xì)胞因子（主要方式）、趨化因子、營(yíng)養(yǎng)因子等發(fā)揮免疫調(diào)控作用。

現(xiàn)在根據(jù)ILCs的發(fā)育和功能將ILCs分為五個(gè)亞群 - NK細(xì)胞，ILC1，ILC2，ILC3和LTi細(xì)胞。

ILC1，ILC2和ILC3在功能方面分別鏡像CD4+ T輔助細(xì)胞Th1，Th2和Th17，而自然殺傷（NK）細(xì)胞反映了CD8+細(xì)胞毒性T細(xì)胞的功能。ILCs和T細(xì)胞在協(xié)調(diào)對(duì)個(gè)體面臨的威脅的適當(dāng)?shù)拿庖叻磻?yīng)方面起著關(guān)鍵作用，ILC1和Th1細(xì)胞對(duì)細(xì)胞內(nèi)病原體（如病毒）和腫瘤有反應(yīng)，主要分泌1型免疫細(xì)胞因子IFN-γ、顆粒酶和穿孔素；ILC2和Th2細(xì)胞有助于抵御蠕蟲(chóng)感染以及過(guò)敏性炎癥，主要分泌2型免疫細(xì)胞因子IL-4、IL-5、IL-13、IL-9等；ILC3和Th17細(xì)胞對(duì)抗細(xì)胞外微生物，如細(xì)菌和真菌，主要分泌3型免疫細(xì)胞因子IL-22、IL-17、GM-CSF等。此外，NK主要分泌1型免疫細(xì)胞因子，與ILC1屬于一類(lèi)；LTi主要分泌TNF、RANK、IL-17、IL-22等，并與二級(jí)淋巴結(jié)構(gòu)形成有關(guān)，單獨(dú)成一類(lèi)。

Reciprocal costimulatory molecules control the activation of mucosal type 3 innate lymphoid cells during engagement with B cells

ILC3s作為先天性淋巴細(xì)胞，產(chǎn)生大量的譜系特異性白細(xì)胞介素(IL)22、IL-17和其他產(chǎn)物，直接或間接影響微環(huán)境中的多種免疫細(xì)胞。誘導(dǎo)型T細(xì)胞共刺激因子(ICOS)參與T細(xì)胞活化以及淋巴組織中T和B細(xì)胞的接合。然而，ICOS在ILC3s和ILC3s參與的免疫微環(huán)境中的功能尚不清楚。本文作者發(fā)現(xiàn)ICOS在人ILC3s上的表達(dá)與ILC3s的激活狀態(tài)相關(guān)。通過(guò)ICOS和CD40信號(hào)的協(xié)同作用，B細(xì)胞促進(jìn)ILC3的功能，因此ICOS對(duì)于ILC3s的非冗余作用及其與鄰近B細(xì)胞的相互作用至關(guān)重要。

雜志：Cellular & Molecular Immunology（IF=22）

實(shí)驗(yàn)方法：FC 、RNAsaq 、mIHC、Transwell

panel ： RoR-γt(ILC3標(biāo)志物）+CD3（T細(xì)胞標(biāo)記物）+CD20（B細(xì)胞標(biāo)記物）

一．鑒定共刺激分子ICOS在人ILCs的表達(dá)

作者首先利用流式細(xì)胞術(shù)觀察ICOS在ILC亞組中的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)ICOS在ILC3s上檢測(cè)到，且扁桃體和肺組織中ICOS+ ilc3的含量普遍高于外周血，一些已知的激活相關(guān)分子在ICOS+ ILC3s檢測(cè)到，但ICOS?ILC3s的表達(dá)量較少，也就是說(shuō)，共刺激分子ICOS在ILC3生物學(xué)中發(fā)揮了重要的作用。

二．ICOS+ ILC3s表現(xiàn)出更多的激活相關(guān)特征

為了探究ICOS對(duì)ILC3s特性的影響，作者分離了扁桃體ILC3s（rorγ - t表征），發(fā)現(xiàn)在IL-7+IL-2+IL-1β+IL-23的刺激下，ILC3s上的ICOS水平升高。伴隨著ILC3存活率的提高和細(xì)胞因子的產(chǎn)生，ICOS可能作為激活相關(guān)的分子在ILC3表面。為了進(jìn)一步闡明ICOS在ILC3s中的作用。作者用IL-7、IL-2、IL-1β、IL-23對(duì)ICOS?和ICOS+ ILC3s進(jìn)行體外刺激,，發(fā)現(xiàn)ICOS+ ILC3s上的ICOS水平高于ICOS- ILC3s，ICOS+ ILC3s中活性ILC3s、KI-67+ ILC3s、NKp44+ ILC3s和CD69+ ILC3s的比例高于ICOS- ILC3s。同時(shí)用ICOS共刺激調(diào)節(jié)性T細(xì)胞和調(diào)節(jié)性ILCs，發(fā)現(xiàn)  ICOS+ ILC3s和ILCregs是兩個(gè)不同且不重疊的ILC亞群?？偟膩?lái)說(shuō)，ICOS在ILC3s中的作用是異構(gòu)的，與ICOS+ T輔助細(xì)胞相比，具有細(xì)胞類(lèi)型特異性。

三．ICOS共刺激可增強(qiáng)ILC3功能

為了闡明ICOS/ICOSL相互作用對(duì)人類(lèi)ILC3s的影響，作者使用ICOS共刺激實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)ICOS/ICOSL通路提供了重要的共刺激信號(hào)，加強(qiáng)了ILC3的激活，ILC3s可能通過(guò)與免疫微環(huán)境中的ICOSL+細(xì)胞相互作用而接收激活調(diào)節(jié)信號(hào)。

四． 扁桃體ILC3s與自體B細(xì)胞之間可以雙向促進(jìn)

B細(xì)胞作為ICOSL的主要提供者和扁桃體中的主要免疫細(xì)胞，為了驗(yàn)證體內(nèi)ILC3s與B細(xì)胞的關(guān)系，作者通過(guò) mIHC發(fā)現(xiàn)ILC3s(RoR-γt+CD3-)與B細(xì)胞(CD20+)在體內(nèi)密切接觸，證明了二者的共存關(guān)系。又對(duì)扁桃體ILC3s和B細(xì)胞進(jìn)行了分選，并以不同的比例共培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)ILC3s促進(jìn)了B細(xì)胞的存活和增殖，促進(jìn)B細(xì)胞分泌IgA和IgM，同時(shí)B細(xì)胞促進(jìn)ILC3產(chǎn)生IL-22、IL-17A、IFN-γ、TNF和GM-CSF等細(xì)胞因子。

五．ILC3s和B細(xì)胞的雙向促進(jìn)需要ICOS/ICOSL誘導(dǎo)的細(xì)胞接觸

作者用Transwell實(shí)驗(yàn)表明ILC3s和B細(xì)胞之間的直接接觸是必不可少的。為了進(jìn)一步探討ICOS在ILC3 - B細(xì)胞中的相互作用，使用阻斷試驗(yàn)進(jìn)行ILC3s和B的功能測(cè)試細(xì)胞。結(jié)果表明，ICOS部分促進(jìn)了在ILC3與B細(xì)胞相互作用過(guò)程中ILC3的活化?？偟膩?lái)說(shuō)，ILC3 -B細(xì)胞相互作用部分是ICOS依賴于信號(hào)，它可能涉及到其他分子誘導(dǎo)ILC3s與B細(xì)胞的接觸。

六．B細(xì)胞增強(qiáng)的ILC3激活需要ICOS和CD40信號(hào)的協(xié)同作用

共刺激分子CD40通常支持ICOS/ ICOSL在T細(xì)胞-B細(xì)胞反應(yīng)中的相互作用，因此作者研究了CD40在ILC3-B細(xì)胞中的相互作用功能，發(fā)現(xiàn)ICOS+ILC3s具有更強(qiáng)的CD40L表達(dá)潛力，ICOSL參與后CD40L+ ILC3s的百分比增加。又進(jìn)一步通過(guò)阻斷實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明CD40信號(hào)通路介導(dǎo)了兩種細(xì)胞之間的相互作用。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)ICOS和CD40信號(hào)在B細(xì)胞介導(dǎo)的ILC3s激活中發(fā)揮協(xié)同作用，其中ICOS是主要成分。此外，ILC3s誘導(dǎo)B細(xì)胞增強(qiáng)功能主要依賴于CD40信號(hào)。

七．總結(jié)

ICOS在人ILC3上的表達(dá)作為次級(jí)激活信號(hào)，有助于ILC3的存活、增殖和細(xì)胞因子(包括IL-22和IL17A)的產(chǎn)生。ICOS和ICOSL相互作用誘導(dǎo)的自體ILC3s與B細(xì)胞的直接接觸促進(jìn)了ILC3s的激活相關(guān)狀態(tài)，這是由CD40信號(hào)協(xié)同介導(dǎo)的。這些結(jié)果表明，ILC3在免疫微環(huán)境中的獨(dú)特和非冗余作用，以及它們對(duì)研究淋巴組織形成過(guò)程中T細(xì)胞非依賴性B細(xì)胞反應(yīng)和Ig類(lèi)轉(zhuǎn)換相關(guān)疾病(如常見(jiàn)變異型免疫缺陷)的重要意義。